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細胞轉染的分類(lèi)

 更新時(shí)間:2024-06-13    點(diǎn)擊量:215
  細胞轉染是指將外源性基因導入到細胞內的技術(shù)。那你知道細胞轉染是如何分類(lèi)的嗎?讓我們一起來(lái)看看吧!
 
  一、根據導入的核酸存在于宿主細胞的時(shí)間長(cháng)短,可分為瞬時(shí)轉染和穩定轉染。
 
  瞬時(shí)轉染(transient transfection):指將精心構建的質(zhì)粒通過(guò)一定方式導入哺乳動(dòng)物細胞內,其中所攜帶的外源基因不與細胞內基因組整合。
 
  細胞中外源基因的瞬時(shí)轉染表達時(shí)間有限,通常僅持續數日,直至外源基因由于細胞分裂過(guò)程中的各種因素而喪失。此方法常用于啟動(dòng)子和其他調控元件的研究。
 
  目前,憑借多種轉染試劑的創(chuàng )新,已能在哺乳動(dòng)物細胞中實(shí)現瞬時(shí)轉染,以生產(chǎn)具有適當折疊和翻譯后修飾的重組蛋白。
 
  穩定轉染(Stable transfected):外源DNA被整合到細胞基因組中或作為附加質(zhì)粒保留在細胞內。與瞬時(shí)轉染不同,穩定轉染能夠與宿主基因組整合,因此轉染細胞及其后代細胞的基因組中同時(shí)保留了轉染的DNA。
 
  由于穩定轉染效率較低,因此選擇有效的轉染策略和篩選方法至關(guān)重要。
 
  二、根據轉染方式可分為化學(xué)、生物和物理方法。
 
  細胞由帶有負電荷的磷脂雙分子層構成,對于大分子物質(zhì)而言,其形成了不可透過(guò)的屏障,例如DNA和RNA的磷酸骨架,它們也帶有負電荷。為了讓核酸穿過(guò)細胞膜,研究人員開(kāi)發(fā)了多種技術(shù),大致分為三類(lèi):
 
  化學(xué)方法:利用載體分子包裹核酸,使其呈現中性電荷或正電荷。例如陽(yáng)離子脂質(zhì)體方法、磷酸鈣共沉淀法、其他陽(yáng)離子物質(zhì)介導等技術(shù)。
 
  生物方法:利用基因工程病毒將非病毒基因轉染至細胞中。目前較常見(jiàn)的是各種病毒介導的轉染技術(shù)。
 
  物理方法:通過(guò)在細胞膜表面產(chǎn)生瞬時(shí)的孔道,導入DNA。例如電穿孔法、顯微注射法。
 
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